根據“廣東省科學技術廳關於2015年度廣東省科學技術獎推薦工作的通知”的要求，現將生物院擬申報項目《豬基因突變技術創新及基因修飾豬模型的建立》的主要完成單位、主要完成人、項目簡介、代表性論文目錄予以公示。若對完成單位、完成人及項目有異議，可在2015年6月29日-7月5日以書麵形式送交科研教育處。異議應當簽署真實姓名或加蓋單位公章，並注明聯係方式，否則不予受理。

　　聯係人：潘光錦　 黃洲萍

　　聯係電話：020-32015213　 020-32093465

　　傳真：020-32015229

　　地址：廣州市科學城開源大道190號

附件：項目名稱、主要完成單位、主要完成人、項目簡介及代表性論文目錄

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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二○一五年六月二十九日

附件：項目名稱、主要完成單位、主要完成人、項目簡介及代表性論文目錄

　　項目名稱：豬基因突變技術創新及基因修飾豬模型的建立

主要完成單位：betway体育下载 ，南方醫科大學，浙江大學，深圳華大基因研究院

主要完成人：

　　賴良學，第一完成人，職稱：研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：團隊負責人，負責項目方向的整體規劃和設計。是5項科學發現的主要完成人，是5篇代表性論文的通訊作者，是其中4名學生的博士指導教師。在本項目中，通過將iPS、鋅指核酸酶（ZFN）介導的基因打靶技術、2A序列介導的多基因協同表達技術應用於豬的基因組修飾，解決了大動物基因打靶效率低以及多基因協同表達的技術瓶頸，並獲得了亨廷頓舞蹈症模型豬和OG2模型。

　　樊娜娜，第二完成人，職稱：副研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：主要負責本項目的具體實施，在第一項科學發現中通過將iPS隨機分化，待外源基因表達沉默後再進行核移植，成功獲得了iPS來源克隆豬，證明豬iPS可以通過核移植技術獲得克隆豬後代，為基於iPS進行基因修飾豬的製作打通了技術路線，為第1篇代表性論文的第一作者。在第2、3、5項科學發現中參與克隆豬的製作，為第2、3、5篇代表性論文的作者。

　　楊化強，第三完成人，職稱：副研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：第2項科學發現的主要完成人，第2篇代表性論文的第一作者。將ZFN介導的基因打靶技術應用於豬基因修飾，實現了高效的基因打靶。

　　顧為望，第四完成人，職稱：教授，工作單位：南方醫科大學，完成單位：南方醫科大學，主要貢獻：作為項目合作方，為本項目中科學發現3“將2A序列介導的多基因協同表達技術應用於豬基因組修飾”和科學發現4、5“人類亨廷頓疾病模型豬製備”和“OG2轉基因模型製備”部分提供研究用豬，共同完成了四色熒光豬和OG2轉基因模型製備，是代表性論文3的通訊作者，代表性論文4和5的作者。

　　肖磊，第五完成人，職稱：教授，工作單位：浙江大學，完成單位：浙江大學，主要貢獻：作為項目合方，為本項目中科學發現1“以iPS為供體細胞進行核移植獲得iPS克隆豬” 提供iPS細胞係，成功獲得了iPS來源克隆豬，是代表性論文1的通訊作者。

　　杜玉濤，第六完成人，職稱：副教授，工作單位：深圳華大基因研究院，完成單位：深圳華大基因研究院，主要貢獻：作為項目合方，共同完成了本項目中科學發現1“以iPS為供體細胞進行核移植獲得iPS克隆豬”IPS克隆豬的製作，是代表性論文1的通訊作者。

　　黃黎珍：第七完成人，職稱：助理研究員，工作單位：華南理工大學，完成單位：南方醫科大學，主要貢獻：是科學發現5的主要完成人，完成了OG2轉基因模型的製備，是代表性論文5的第一作者。

　　陳霽君：第八完成人，職稱：未取得，工作單位：浙江大學，完成單位：浙江大學，主要貢獻：是科學發現1中豬IPS細胞係的誘導者，是代表性論文1的第一作者。

　　商周春：第九完成人，職稱：助理研究員，工作單位：深圳華大基因研究院，完成單位：深圳華大基因研究院，主要貢獻：是科學發現1中豬IPS克隆豬的製作者，是代表性論文1的第一作者。

　　楊東山，第十完成人，職稱：副研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：科學發現2“ZFN介導的基因打靶技術應用於豬基因組修飾研究”和科學發現4“人類亨廷頓疾病模型豬的製備”主要完成人。是代表性論文2和4的第一作者。

　　趙本田，第十一完成人，職稱：助理研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：是項目5項科學發現中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、ips克隆豬、人類亨廷頓疾病模型豬、 OG2轉基因模型豬，所有以上模型豬的核移植胚胎製作者。是5篇代表性論文的作者。

　　歐陽振，第十二完成人，職稱：助理研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：是項目5項科學發現中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、ips克隆豬、人類亨廷頓疾病模型豬、OG2轉基因模型豬，所有以上模型豬的核移植胚胎製作者。是5篇代表性論文的作者。

　　劉朝明，第十三完成人，職稱：助理研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：是項目中科學發現1、2、3、4中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、iPS克隆豬、人類亨廷頓疾病模型豬，所有這些模型豬的胚胎移植者，是代表性論文1、2、3、4的作者。

　　趙宇，第十四完成人，職稱：助理研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：是科學發現1、2、3中ZFN打靶豬、2A序列介導的四色熒光豬、iPS克隆豬，所有這些模型豬的胚胎移植者， 並負責出生克隆豬的防疫護理，是代表性論文1、2、3的作者。

　　鄧為，第十五完成人，職稱：副研究員，工作單位：betway体育下载 ，完成單位：betway体育下载 ，主要貢獻：是科學發現3“將2A序列介導的多基因協同表達技術應用於豬基因組修飾”研究的主要完成者，是代表性論文3的作者。

項目簡介：

　　本項目屬於生命科學生物學中的動物模型研究領域，為基礎研究項目。自2007年起，本團隊聚焦大動物基因修飾技術研究及基因修飾動物模型的建立工作。在國際上取得了多項技術突破，並在此基礎上獲得了亨廷頓疾病模型豬和OG2轉基因模型。

　　項目主要內容如下：

　　1、首次獲得了iPS 克隆豬，證明了豬iPS通過核移植途徑獲得後代個體的可行性，為基於iPS 進行基因修飾大動物的製作打通了技術路線。

　　2、首次將鋅指核酸酶(zinc finger nuclease, ZFN)介導的基因打靶技術應用於豬基因修飾，使豬體細胞打靶效率由10-6 提高到4%，並成功獲得了內源性基因打靶豬，實現了對大動物高效基因打靶。

　　3、首次將2A序列介導的多基因轉移技術應用於豬基因組修飾，成功獲得了四色熒光豬，並實現了多個外源基因在動物體內的高效協同表達。

　　4、成功獲得了人類亨廷頓舞蹈症的轉基因豬模型，並首次在亨廷頓舞蹈症的動物模型大腦中發現與人類亨廷頓舞蹈症患者腦中類似的神經細胞凋亡現象。

　　5、獲得了OG2轉基因豬模型，為研究胚胎發育和追蹤幹細胞的多潛能性提供了帶有標記的工具豬模型。

　　以上工作緊密圍繞大動物基因修飾技術進行研究，解決了缺乏ES 係大動物基因修飾研究中的兩大技術難題-基因打靶效率低和多基因協同表達困難，同時，iPS克隆豬的獲得為以iPS替代ES進行基因修飾豬製作打通了技術路線，並在技術突破的基礎上成功獲得人類亨廷頓舞蹈症模型豬和OG2轉基因模型。

　　本項目在Cell Research、Human Molecular Genetics等雜誌上發表論文5篇，其中發表在Human Molecular Genetics的論文被選為封麵文章刊出。論文被SCI數據庫論文總引用149次，他引115次，單篇最高引用49次，他引42次。項目在大動物基因修飾技術方麵所取得的突破及所獲得的動物模型將進一步促進基因修飾大動物作為生物醫藥模型的研究，推動生物醫藥業的發展，具有巨大的社會效益和經濟效益。

代表性論文目錄：

　　1. Piglets cloned from induced pluripotent stem cells. Fan N, Chen J, Shang Z, Dou H, Ji G, Zou Q, Wu L,He L, Wang F, Liu K, Liu N, Han J, Zhou Q, Pan D, Yang D, Zhao B, Ouyang Z, Liu Z, Zhao Y, Lin L,Zhong C, Wang Q, Wang S, Xu Y, Luan J, Liang Y, Yang Z, Li J, Lu C, Vajta G, Li Z, Ouyang H, Wang H,Wang Y, Yang Y, Liu Z, Wei H, Luan Z, Esteban MA, Deng H, Yang H, Pei D, Li N, Pei G, Liu L, Du Y,Xiao L, Lai L. Cell Res. 2013 Jan;23(1):162-6.

　　2. Generation of PPARγ mono-allelic knockout pigs via zinc-finger nucleases and nuclear transfer

　　cloning.Yang D, Yang H, Li W, Zhao B, Ouyang Z, Liu Z, Zhao Y, Fan N, Song J, Tian J, Li F, Zhang J,Chang L, Pei D, Chen YE, Lai L.Cell Res. 2011 Jun;21(6):979-82.

　　3. Use of the 2A peptide for generation of multi-transgenic pigs through a single round of nuclear transfer.Deng W, Yang D, Zhao B, Ouyang Z, Song J, Fan N, Liu Z, Zhao Y, Wu Q, Nashun B, Tang J, Wu Z, GuW, Lai L.PLoS One. 2011;6(5):e19986.

　　4. Expression of Huntington's disease protein results in apoptotic neurons in the brains of cloned transgenicpigs.Yang D, Wang CE, Zhao B, Li W, Ouyang Z, Liu Z, Yang H, Fan P, O'Neill A, Gu W, Yi H, Li S, LaiL, Li XJ.Hum Mol Genet. 2010 Oct 15;19(20):3983-94.

　　5. Establishment of a porcine Oct-4 promoter-driven EGFP reporter system for monitoring pluripotency ofporcine stem cells.Huang L, Fan N, Cai J, Yang D, Zhao B, Ouyang Z, Gu W, Lai L.Cell Reprogram. 2011Apr;13(2):93-8.