中科院廣州生物醫藥與健康研究院陳永龍研究組與香港中文大學趙暉研究組合作，成功利用CRISPR/Cas9係統在熱帶爪蛙中建立了基因定點敲入方法，該研究成果“Heritable CRISPR/Cas9-mediated targeted integration in Xenopus tropicalis”於8月12日在線發表在美國實驗生物學學會聯合會雜誌（FASEB.J）上。

　　長期以來，作為理想的脊椎動物模型，熱帶爪蛙在胚胎學、發育生物學研究中發揮著重要作用。近年來，隨著基因編輯技術不斷改進，人們已經在多種模式生物中成功地進行了基因定點破壞和插入。同時，研究人員利用ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9技術對爪蛙進行基因定點破壞，但一直無法進行基因定點敲入，極大限製了熱帶爪蛙在發育生物學與人類醫學研究中的應用。

　　研究組石照應等利用CRISPR/Cas9技術結合胰腺特異性表達報告基因（ela:GFP），運用DNA雙鏈斷裂損傷修複機製，分別在熱帶爪蛙的3個基因（ets1，ets2，tyr）外顯子和內含子設計gRNA位點，首次成功地獲得了在這3個基因位點中定點敲入的熱帶爪蛙品係，插入元件可通過種係遺傳到下一代，tyr插入位點F2代純合子（tyrt/t）如期展現了白化表型。另外，研究組在G0代成功地用GFP示蹤了n-tubulin的內源表達。

　　該研究首次在熱帶爪蛙中實現了基因組特定位點的敲入，同時實現了多個基因位點的敲入。這是一種高效、簡單、可廣泛應用的方法，可以進行爪蛙譜係追蹤，建立熱帶爪蛙的人類遺傳疾病模型，將大大提升爪蛙對人類醫學研究的貢獻。

　　該研究獲得科技部973、國家自然科學基金項目等經費的支持。

GFP敲入示蹤熱帶爪蛙n-tubulin基因的內源表達